ADNasa

OBJETIVO

Determinación de la actividad desoxirribonucleasa en un muestra de microorganismos problema por identificar.

 

FUNDAMENTO

Esta técnica consiste en la siembra de un microorgnismo en un medio de cultivo con ADN e incubacion para posteriormente desnaturalizar con acido fuerte el ADN para saber si sigue estando en el medio de cultivo o ha sido consumido por el microorganismo sembrado en la placa.

Se suele hacer en bacterias grampositivas para diferenciar entre staphylococcus aureus y epidermidis.

 

MATERIALES

• Papel de filtro
• Vaso de precipitado (residuos)

• Mechero Bunsen

• Mechero

• Placa con microrganismos

• Medio de cultivo agar nutritivo con ADN

• Asa de siembra

• HCL

• Micropipeta

• Puntas de micropipeta

• Estufa.

 

PROCEDIMIENTO

1. Preparar todo el material necesario debidamente ordenado y rotulado sobre un papel de filtro en la mesa de trabajo
2. Encender el mechero bunsen con la ayuda de un mechero para crear un area de esterilidad alrededor de este donde poder trabajar sin riesgo de contaminar la muestra
3. Coger una muestra representativa de microorganismos problema con asa de siembra esterilizada previamente
4. Sembrar la muestra en el centro de la placa con medio de cultivo haciendo una rejilla cuadrada
5. Incubar a 37ºC durante 24-48 horas en una estufa
6. Llevar la placa con el cultivo a una campana de flujo laminar y echarle un poco de HCL hasta cubrir la superficie de la placa
7. Observar los resultados

 

RESULTADOS

Los posibles resultados son:

• Positivo: bordes turbios y centro un halo transparante (ausencia de ADN en el centro porque lo ha consumido la muestra de microorganismos) (staphylococcus epidermidis)
• Negativo: toda la placa entera turbia (ADN desnaturaalizado por toda la placa)

En nuestro caso, el resultado fue positivo, por lo que junto al resto de pruebas lo mas probable es que fuese un staphylococcus epidermidis

 

PRECAUCIONES

• Todo debe estar adecuadamente etiquetado para evitar errores a la hora de interpretar los resultados para cada paciente
• Hay que tener cuidado de no tocar distintas muestras con las mismas asas de platino sin esterilizarlas previamente para evitar contaminaciones cruzadas
• Todos los reactivos deben estar dentro de fecha para asegurar la precisión de los resultados
• Todo debe estar trabajado en condiciones de esterilidad para evitar contaminaciones y equivocaciones a la hora de dar los resultados
• Hay que tener mucho cuidado a la hora de trabajar con el HCL puesto que es un acido fuerte y es peligroso, por lo que hay que trabajarlo con seguridad