Determinación de proteina C reactiva

OBJETIVO

Determinación cuantitativamente de proteína C reactiva en suero o plasma humano.

 

FUNDAMENTO

La proteina C reacciona con el ac especifico y forma inmunocomplejos insolubles que puede medirse por espectrofotometría, siendo la concentración directamente proporcional a la absorbancia medida por el espectrofotómetro.

 

MATERIALES

• Vaso de precipitado
• Micropipetas
• Puntas de micropipetas
• Gradillas de cubetas de espectrofotometría
• Cubeta de espectrofotmetría (1cm de paso de luz)
• gradilla para tubos de ensayo
• Muestra: suero
• Reactivos:
  • R1: tampón
  • R2: particulas de latex cubiertas con ig G
  • CRP-CAL: calibrador (62 mg/L)
  • control: suero (opcional)

Fuente: fotos tomadas por mi en el laboratorio de analisis clinico del IES albaida

PROCEDIMIENTO

1. Preparar todo el material necesario sobre la mesa con un papel de filtro.
2. Encender el espectrofotómetro para que se estabilice la lampara al menos 15 minutos antes.
3. Atemperar los reactivos (y el espectrofotómetro si es posible) a 37ºC.
4. ajustar el espectrofotómetro a 540 nm y hacer un blanco frente a agua destilada.
5. Coger dos cubetas y poner:
   • Calibrador: 800µL de diluyente R1 + 200µL látex R2 + 5µL de calibrador o patrón.
   • Muestra: 800µL de diluyente R1 + 200µL látex R2 + 5µL de muestra.
     

     

     

     
     
     

     Fuente: fotos tomadas por mi en el laboratorio de analisis clinico del IES albaida

6. Introducir en el espectrofotómetro la cubeta del calibrador y medir la absorbancia al principio (nada mas introducir la cubeta) y al paso de 2 minutos.
7. repetir el paso anterior con la cubeta con la muestra.
8. apagar el espectrofotómetro
9. realzar las cuentas necesarias aplicando la siguiente formula:

 

RESULTADOS

• Abosorbancia de la muestra:
  • A1= 1,093
  • A2= 1,122
• Absorbancia del calibrador:
  • A1= 1,135
  • A2= 1,193

Aplicamos la fórmula: (1.122-1.093)/(1.193-1.135) x 62 = 31 mg/L

El resultado obtenido es 31mg/L

 

INTERPRETACIÓN

Esta técnica tiene un margen de error de 10 por arriba y 10 por abajo, es alto. Nuestros resultados han sido lógicos dadas las condiciones del laboratorio.

 

PRECAUCIONES

• Respetar adecuadamente los tiempos para que los resultados sean lo mas precisos posibles.
• Cambiar las puntas de pipeta cada vez que se pipetea para evitar contaminaciones entre las distintas muestras y controles.
• Encender unos 20 minutos antes el espectrofotómetro para que se estabilice adecuadamente la lampara.
• Asegurarnos de ajustar el blanco a la correcta longitud de onda para medir realmente lo que queremos cuantificar.

 

BIBLIOGRAFÍA Y WEBGRAFÍA

IMÁGENES: las imágenes aportadas a en este PNT para su realización son realizadas por mi en el laboratorio del instituto I.E.S. Albaida.

INFORMACIÓN:

• Protocolo obtenido del profesorado del instituto I.E.S. Albaida
• Wikipedia: https://es.wikipedia.org/wiki/Wikipedia:Portada
• Blog de laboratorio clínico: http://laboratorioareaclinica.blogspot.com/search/label/Tinciones%20bacteriol%C3%B3gicas