Elaboración de medios de cultivo en placa petri

 

OBJETIVO

Preparación de medios de cultivo para microorganismo.

 

FUNDAMENTO

El agar nutritivo (un medio de cultivo), es un medio solido para cualquier tipo de microorganismo, puesto que dispone de los nutrientes adecuados para su desarrollo.

 

MATERIAL

• Papel de filtro
• Probeta
• Frasco de vidrio
• Varilla de vidrio
• Embudo
• Vidrio de reloj
• Pipeta
• Frasco lavador
• Microondas
• Prepipeta
• Papel de aluminio
• Placas petri
• Cabina de seguridad
• Control de esterilización
• Autoclave
• Agar nutritivo
• Agua destilada

 

PROCEDIMIENTO

1. Medir la cantidad de agua destilada que se desea preparar de medio de cultivo. en nuestro caso 300 ml.
2. Medir la cantidad de agar nutritivo necesaria para la cantidad de agua que vamos a elaborar según las instrucciones que vienen en el envase, en un vidrio de reloj en una balanza de precisión. Nosotros 12g de agar, puesto que son 40g/L
3. Echar el agar en el frasco con agua destilada con la ayuda de un frasco lavador para no dejarnos nada. mezclar bien con la ayuda de una varilla de vidrio.
4. Tapar el frasco con su tapón sin llegar a cerrarlo completamente y ponerle en el exterior una cinta adhesiva con los datos del medio (nombre, fecha, cantidad,etc.) y un trozo de cinta control de esterilización.
5. Introducir en el microondas durante 2 minutos aproximadamente (hasta que esté a punto de hervir, pero que no llegue a hacerlo).
6. Sacar del microondas y agitar bien, para asegurarnos de que quede bien homogeneizado.
7. Introducir en el autoclave y esterilizar durante 15 minutos a 121ºC a 1ATM de presión.
8. Sacar el frasco con el medio del autoclave y dejar enfriar un poco.
9. Encender la cabina de seguridad un rato antes (mientras que se enfría el agar).
10. Rotular por la parte inferior las placas de petri con un permanente.
11. Llenar las placas petri cubriendo por completo su superficie dentro de la cabina de seguridad, asegurándonos de esta manera de no contaminar los medios.
12. Dejar enfriar sin tapar las placas para que no se empañen dentro de la cabina hasta que se solidifiquen.
13. Introducir las placas petri en la nevera envueltas en papel de aluminio en montones de 10-12 placas.

 

RESULTADOS

El resultado es un medio solido de agar nutritivo en placa petri para el cultivo de microorganismo en general.

 

PRECAUCIONES

• No meter las placas de petri en el autoclave, ya vienen esterilizadas y se fundirían por el calor.
• No llenar las placas de petri en sobre una mesa sin mas, realizar este proceso en condiciones e esterilidad, ya sea en una cabina de seguridad o en una mesa con el mechero bunsen encendido.
• No tapar inmediatamente las placa petri después de llenarlas, se empañarían y darían un resultado no deseado quedando muy sucias.
• Limpiar la superficie de la cabina de seguridad si vamos a trabajar en ella.
• Asegurarnos de que el control de esterilidad haya funcionado, para saber con certeza si se han alcanzado las condiciones de esterilidad.
• Todo el proceso de elaboración del agar-nutritivo se puede hacer sin condiciones de esterilidad, puesto que después se introducirá en el autoclave.