Determinación de triglicéridos

OBJETIVO

Determinación cuantitativa de triglicéridos en suero.

FUNDAMENTO

Esta técnica se basa en un método enzimatico colorimétrico. Los trigliceridos incubados con lipoproteinilipasa (LPL) liberan glicerol y ácidos grasos libres. El glicerol es fosforilado (adición de un grupo fosfato inorgánico a cualquier otra molécula) por glicerolfosfato deshindogenasa (GPO) y ATP con glicerol quintas (GK) y produce gliceron-3-fosfato (G3P) y adenosina fosfato (DAP) y peróxido de hidrógeno por GPO.

Por ultimo, el peróxido de hidrógeno reacciona con 4-aminofenazona (4-AF) y p-clorofenol, reacción canalizada por la peroxidasa dando lugar a una coloración roja, la cual, es directamente proporcional a la concentración de trigliceridos en suero.

MATERIALES

Cubetas de espectrofotometria
Espectofotometro
Gradilla para cubetas
Papel de filtro
Micropipeta
Puntas de micropipeta
Vaso de precipitado
Muestra: suero
Reactivos:
- R1: tampón
- R2: enzimas
- Patrón: Trigliceridos cal (200mg/dL)

PROCEDIMIENTO

Encendemos el espectrofotómetro para que se equilibre el equipo.
Preparamos el Reactivo de Trabajo (RT) disolviendo el contenido de R2 en el bote de R1.
Preparamos tres cubetas con los siguientes contenidos:
- Blanco: 1mL de RT
- Patrón: 1mL de RT + 10µL de patrón
- Muestra: 1mL de RT + 10 µL de muestra
Dejamos incubar durante 10 minutos a temperatura ambiente asegurándonos que quede bien homogeneizada la disolución.
Ajustamos el espectrofotómetro a 505 nm.
Ajustamos blanco con la cubeta que solo contiene RT.
Medimos el patrón y anotamos la absorbancia obtenida.
Medimos la muestra y anotamos la absorbancia obtenida.
Apagamos el espectrofotómetro.
Calculamos el colesterol total sustituyendo los datos obtenidos en la siguiente formula: