OBJETIVO
Observar al microscopio de linfocitos mediante la separación de los diferentes componentes de la sangre según su gradiente de densidad.
FUNDAMENTO
Es una técnica de separación de células sanguíneas mediante centrifugación. La separación de las células se debe a la diferencia de densidad entre los distintos tipos de células que componen la sangre. Las células con mayor densidad quedarían en el fondo del tubo tras la centrifugación, y en la parte superior las de menor densidad. Por la zona intermedia, quedaría como una especie de nube en la que estarían las células que nosotros queremos observar, lo que mas veremos serán linfocitos.
Antes de observar al microscopio, se hará una extensión y tinción con panóptico rápido.
MATERIALES
- Tubos de plástico de 10 mL
- Pipetas pasteur
- Suero fisiológico estéril
- Portaobjetos
- Centrifuga
- Gradilla
- Micropipeta
- Puntas de micropipeta
- Microscopio
- Muestra: Sangre con EDTA
- Reactivo: Ficoll
PROCEDIMIENTO
- Poner 2ml de sangre y 2ml de suero fisiológico en un tubo.
- En otro tubo poner 3ml de ficoll y 4 ml de la dilución de sangre, teniendo mucho cuidado de que no se mezclen, por lo que hay que depositar la sangre despacio y dejando que caiga por la pared del tubo.
Fuente: foto tomada por mi en el laboratorio del instituto IES Albaida 
Fuente: foto tomada por mi en el laboratorio del instituto IES Albaida - Centrifugar a 1800rpm durante 25
- Retirar el sobrenadante con una pipeta pasteur con cuidado de no llevarnos la fracción de leucocitos que esta entre el sobrenadante y el sedimento.
Fuente: Libro de tecnicas de inmunodiagnostico de 2 de laboratorio clinico y biomedico - Realizar una extensión y la dejamos secar al aire
- Teñir con panóptico rápido la extensión, realizando 5 inmersiones de 1 segundo en cada cubeta (entre cada cubeta lavamos con agua).
- Secar y observar al microscopio.
RESULTADOS
la extensión no se veía del todo claro, por lo que no hemos visto muchos linfocitos, pero alguno si que hemos visto claramente.
INTERPRETACIÓN
No disponíamos de suficiente sangre, por lo que hemos tenido que usar otras medidas y la cantidad de linfocitos era menor, por lo que la fracción era mas pequeña y mas complicada de coger bien, por lo que creemos que nos hemos dejado parte en el tubo y por eso no hemos conseguido ver muchos linfocitos en la preparación.
PRECAUCIONES
- Hay que tener cuidado de que no se mezcle el ficol y la muestra cuando se juntan en el mismo tubo antes de la centrifugacion.
- Al retirar el sobrenadante para obervar los leucocitos al microscopio, debemos de intentar asegurar de coger la fracción que nos interesa para su observación al microscopio.
- Todo debe estar correctamente etiquetado para evitar confusiones con los resultados por error de cruzamiento de muestras.
BIBLIOGRAFÍA Y WEBGRAFÍA
IMÁGENES: las imágenes aportadas a en este PNT para su realización son realizadas por mi en el laboratorio del instituto I.E.S. Albaida.
INFORMACIÓN:
- Protocolo obtenido del profesorado del instituto I.E.S. Albaida
- Wikipedia: https://es.wikipedia.org/wiki/Wikipedia:Portada
- Blog de laboratorio clínico: http://laboratorioareaclinica.blogspot.com/search/label/Tinciones%20bacteriol%C3%B3gicas
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