Antibiograma

OBJETIVO

Conocer la sensibilidad y la resistencia de determinados microorganismos de una muestra a antibióticos para poder ponerle un tratamiento al paciente.

 

FUNDAMENTO

Esta técnica se basa en un siembra en césped, es decir, una siembra homogénea por toda la superficie de la placa petri, junto unos discos con antibióticos que inhiben o no el crecimiento de las bacterias a su alrededor. Esto determina si un antibiótico es útil o no frente un determinado microorganismo y si lo es, si es mas o menos efectivo en función del diámetro de halo de inhibición.

 

MATERIALES

• Papel de filtro
• Mechero bunsen
• Mechero
• 2 Vasos de precipitado
• Pinzas
• Tubo de ensayo
• Tubo 0.5 escala macfarland
• Estufa
• Micropipeta
• Puntas de micropipeta
• Solución fisiológica
• Cartulina fondo negro
• Asa de digralsky
• Asa de platino
• Discos de antibioticos para antibiograma
• Medio de cultivo agar Müller-Hinton
• Muestra: cultivo de microorganismos en placa petri

 

PROCEDIMIENTO

1. Preparar todo el material necesario debidamente ordenado y rotulado sobre un papel de filtro en la mesa de trabajo
2. Encender el mechero bunsen con la ayuda de un mechero para crear un área de esterilidad alrededor de este donde poder trabajar sin riesgo de contaminar la muestra
3. Colocar un poco solución fisiológica en un tubo, añadir con un asa de platino muestra e igualar la turbidez a 0.5 en la escala macfarland
4. Con una micropipeta, añadir 0.1 mL de solución fisiologica con bacterias al medio de cultivo agar Müller-Hinton
5. Con un asa de digralsky, extender el 0.1 mL de muestra bien por toda la superficie de la placa de la forma mas homogénea posible
6. Colocar en un vaso de precipitado un poco de alcohol para poder esterilizar la punta de las pinzas con alcohol por flameado con el mechero bunsen
7. Esterilizar las pinzas y colocar un disco de antibiótico entre el centro y una de las paredes
8. Repetir el paso anterior hasta colocar 5 antibióticos diferentes en la placa
9. Incubar a 37ºC en una estufa durante 24-48 horas
10. Observar los resultados y medir los diámetros de los halos de inhibición de cada antibiótico para ver cual es mas eficaz

 

RESULTADOS

Los resulta posibles son:

• No inhibe: no hay halo de inhibición
• Inhibición insuficiente:menos de 0.5 cm de halo de inhibición
• Inhibición suficiente: mayor de 0.5 cm de halo de inhibición

Cuanto mayor sea el halo de inhibición mayor es la eficacia de ese antibiótico frente a la bacteria cultivada en ese antibiograma.

En nuestro caso los resultados fueron los siguientes:

PACIENTE 2:

• SXT -> 3cm

• CL -> 1,2cm

• FOX -> 3,6cm

• C -> 3,6cm

• NN -> 1,7cm

 

PACIENTE 5:

• CF -> 1,8cm

• C -> 2,2cm

• FOX -> 2,8cm

• GM -> 3,4cm

• SXT -> 2,8cm

 

PRECAUCIONES

• Todo debe estar adecuadamente etiquetado para evitar errores a la hora de interpretar los resultados para cada paciente
• Hay que tener cuidado de no tocar distintas muestras con las mismas asas de platino sin esterilizarlas previamente para evitar contaminaciones cruzadas
• Todos los reactivos deben estar dentro de fecha para asegurar la precisión de los resultados
• Todo debe estar trabajado en condiciones de esterilidad para evitar contaminaciones y equivocaciones a la hora de dar los resultados
• Entre un disco y otro, hay que esterilizar las pinzas para evitar errores después a la hora de la lectura del antibiograma por contaminación al mezclarse varios antibióticos en un mismo disco