Determinación de proteinas totales (espectrofotometría de absorción)

 

OBJETIVO

Determinación cuantitativa la cantidad de proteínas totales en suero.

 

FUNDAMENTO

Las proteínas actúan como elementos estructurales y de transporte. Su determinación puede ser útil en hiperproteinemia y en hipoproteinemia.

La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de proteína total en la muestra; por lo que midiendo la cantidad de radiación (el color) absorbida por la muestra, podemos determinar cuantitativamente la cantidad de proteínas presentes en la muestra problema.

 

MATERIALES

• Muestra (Suero heparinizado)
• Espectrofotómetro
• cubetas de espectrofotometría (1cm de paso de luz)
• micropipetas
• Puntas de pipeta.
• Gradillas para cubetas de espectrofotometría
• reactivos
  • RT—> Biuret
  • T protein cal — >Patrón primario de albúmina bovina (7 g/dL)
• Agua destilada.

 

PROCEDIMIENTO 

Primero vamos a preparar 4 cubetas de espectrofotometría con los siguientes contenidos:

• Blanco: Agua destilada
• Blanco reactivo: 1 ml de RT
• Patrón: 1 ml de RT + 25 µL de patrón
• Muestra: 1 ml de RT + 25 µL de muestra

Para que las cubetas estén correctamente preparadas, debemos homogeneizar con la pipeta, asegurándonos que todo quede perfectamente mezclado y sin burbujas. Después de esto, debemos dejar 10 minutos incubando para que se terminen completamente las reacciones.

Ajustamos el espectrofotómetro a 340 nm y ponemos a 0 frente a la cubeta con el blanco (agua destilada) preparada previamente.

Medimos los valores de absorbancia de las cubetas con blanco reactivo, patrón y muestra, y los apuntamos debidamente identificados.

Apagamos el equipo y calculamos la concentración de la muestra mediante la aplicación de la formula siguiente:

((A)Muestra-(A)Blanco / (A)Patrón-(A)Blanco)x 7 (C. patrón) = g/dL de proteínas totales

 

RESULTADOS

AbsorbancIa del blanco reactivo: 0,017

Absorbancia del patrón: 0,523

Absorbancia de la muestra: 0,445

Concentración: ((0,445-0,017)/(0,523-0,017)) x 7 = 5,92 g/dL

 

INTERPRETACIÓN

Nos ha salido una concentración un poco por debajo de la media.

Creemos que ha podido ser porque las cubetas contenían gotas de agua de otras elaboraciones y al prepararlas para realizar esta prueba han quedado un poco más diluidas.