Seminograma

Objetivo

Determinación de fertilidad del hombre en función de la viabilidad de los espermatozoides (movilidad, morfología, vitalidad y recuento) y la calidad del líquido seminal (composición, viscosidad, volumen, color, ph y filancia).

Materiales

Baño térmico
Pipetas pasteur
Varilla de vidrio
Portaobjetos
Cubetas de espectrofotometría (1cm paso de luz)
Gradilla para cubetas de espectrofotometría
Vaso de precipitado
Cámaras neubauer
Tiras de ph
Tubos graduados
Tarjeta de aglutinación
Palillos desechables
Muestra: semen
Reactivos:
- Tinción panóptico rápido:
  - Fijador
  - Eosina
  - Azul de metileno
- Tinción eosina-nigrosina
- Kit determinación inmunología de IgG (Anticuerpos antiespermatozoides)
- Disolución de macomber-saunders
- KIT spermmar-test-IgG

Procedimiento

Examen físico del semen

la muestra debe ser procesada en el menor tiempo posible e intentando mantener la temperatura constante de la muestra a 37ºC para evitar el deterioro de esta y conseguir obtener unos resultados lo más reales posibles.

Homogeneizar la muestra antes de trabajar con ella.

Trasvasar la muestra a un tubo para medir el volumen total de semen.

Medir el tiempo de licuación de la muestra, es decir, cuando pasa de estar en un estado viscoso a un estado líquido. Para ello debemos conocer la hora en la que se recogió la muestra y la hora a la que la muestra se ha licuado, para poder calcular el tiempo que ha trascurrido. Los valores pueden oscilar entre 15 y 60 minutos.

Observar el color de la muestra, que puede oscilar entre blanco opalescente y blanco amarillento, habiendo varios colores posibles, que pueden indicar presencia de sangre o infección entre otras posibilidades.

Medir la viscosidad con una varilla y una pipeta pasteur, debe caer gota a gota formando hilos cortos (2 cm aprox), si cae formando hilos largos, la viscosidad esta aumentada y si cae sin necesidad de apretar la pipeta, la viscosidad esta disminuida.

Medir el ph con la ayuda de tiras reactivas medidoras de ph.

Examen microscópico

¡Antes de depositar la gota en el portaobjetos, atemperarlo a 37ºC¡

Movilidad (en fresco)

Se deposita una gota (10µL) sobre el portaobjetos atemperado y se cubre con un cubreobjetos.

Observar al microscopio con el objetivo de 40x

Vitalidad (tinción eosina-nigrosina)

Depositar en un tubo 50 µL de semen y 50 µL de eosina al 1% en agua.

Esperar 20 o 30 segundos.

Añadir 100 µL de nigrosina al 10% en agua con/sin glicerina al 75% y homogeneizamos.

Realizar una extensión sobre un porta atemperado y dejar secar.

Observar al microscopio con el objetivo de 40x

Recuento (cámara neubauer)

Diluir el semen en una disolución con macomber-saunders al 1/21 (0.05ml semen + 1 ml macomber-saunders) directamente sobre la cámara neubauer y esperar 2 minutos.

Observar la preparación al microscopio con el objetivo de 40x.

Hacer un recuento de una de las cuadriculas de las esquinas y el resultado se introduce en la siguiente ecuación:

N x 21 x 10000 = número total de espermatozoides

Morfología (tinción con panóptico rápido)

Realizar una extensión de semen depositando 1 gota (10µL) sobre un portaobjetos atemperado previamente.

Realizar una tinción con panóptico rápido introduciendo 5 veces (1 segundo cada inmersión) en las 3 cubetas.

Observar al microscopio con el objetivo de 40x.

Examen quimico (espectrofotometría)

Consiste en una cuantificación de fructosa y acido cítrico.

No lo vamos a realizar, pero deberíamos hacerlo en un seminograma normalmente.

Examen inmunológico (espermmar-test-IgG)

Atemperar los reactivos y las muestras.

Depositar en una tarjeta de aglutinación una gota (10µL) de semen fresco sin tratar + una gota (10µL) de partículas de latex IgG + una gota (10µL) de antisuero.

Mezclar con la ayuda de un palillo desechable.

Observar bajo el microscopio la presencia de aglutinación tras 2 o 3 minutos.

Si aglutina es positivo (si supera el 40% infertilidad total, entre 10 y 39% posibilidad de infertilidad).

Si no aglutina es negativo (hay fertilidad).