OBJETIVO
Mejorar el contraste de las bacterias con el fondo para mejorar la visualización del movimiento de microorganismos vivos.
FUNDAMENTO
Esta técnica, al no tener fijación, permite ver el movimiento de los microorganismo. Ademas, mejora el contraste al estar teñidas las células, facilitando su visión, pero esta lo suficientemente diluido el colorante como para que tiña, pero sin llegar a matar los microorganismo.
MATERIAL
- Papel de filtro
- Tubo de vidrio (para preparar el colorante diluido)
- Frasco lavador
- Pipeta
- Prepipeta
- Micropipeta
- Puntas de micropipeta
- Rotulador permanente
- Portaobjetos
- Cubreobjetos
- Mechero bunsen
- Mechero
- Vaso de precipitado
- Barras paralelas
- Cubeta para tinciones
- Muestra (cultivo en agua de peptona)
- Rojo de metilo.
PROCEDIMIENTO
Primero, prepararemos el rojo de metilo diluido a la concentración 1:500. para ello:
- Medimos con la pipeta 5 mL de agua destilada y los vertemos en un tubo de vidrio.
- Con una micropipeta, medimos 10μL de rojo de metilo y los añadimos a los 5 mL de agua destilada.
- Mezclamos bien el tubo con la ayuda de una pipeta o con movimientos de inversión
A continuación, realizaremos la tincion. Para ello:
- Encendemos el mechero para crear un área de esterilidad.
- Depositamos una gota de rojo de metilo diluido preparado previamente sobre el portaobjetos con la ayuda de una micropipeta.
- Cogemos una gota de muestra del cultivo en agua de peptona y la depositamos sobre el porta objetos con la ayuda de una micropipeta.
- Con la misma punta de la micropipeta, extendemos la muestra.
- Cubrimos la muestra con un cubreobjetos.
- Apagamos el mechero bunsen.
RESULTADOS
Visualización de microorganismo con el suficiente contraste respecto al fondo como para ser visto claramente.
INTERPRETACIÓN
Hemos podido ver perfectamente el movimiento de muchos microorganismos (sobre todo ambientales) en la muestra de lluvia. hemos visto como las bacterias, no tienen unos movimiento rectos perfecto, sino que se mueven mayoritariamente sin sentido ninguno en todas las direcciones.
PRECAUCIONES
- Usar siempre guantes.
- no diluir poco la muestra, puesto que podría matar las células y no permitirnos ver el movimiento de estas.
- No colocar demasiada muestra o colorante, pues se saldría al colocar el cubreobjetos.
- Colocar correctamente el cubreobjetos sin burbujas que nos puedan impedir la perfecta visualización de la muestra.
- Rotular correctamente todo.
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