Determinación de anticuerpos anti-T. gondii (Toxoplasmosis)

OBJETIVO

Detección de anticuerpos anti-T.gondii.

 

FUNDAMENTO

Esta técnica se basa en una hemaglutinación indirecta, es decir, en la capacidad de los anticuerpos anti-T.gondii de unirse a glóbulos rojos sensibilizados con antígenos del parásito formando inmunocomplejos.

 

MATERIALES

• Micropipeta
• Puntas de micropipeta
• Placa de microtitulacion
• Vaso de precipitado
• Muestra: suero
• Reactivos:
  • R1: hematies sensibilizados
  • R2: hematies no sensibilizados
  • R3: absorbente
  • BUF: tampón fosfato
  • Control +
  • Control –

 

PROCEDIMIENTO

1. Atemperamos los reactivos y la muestra a temperatura ambiente.
2. Preparamos una dilución madre (1/40) de la muestra a analizar en tampón fosfato, para ello, mezclamos 50µL con 1,95 mL.
3. Ponemos 50µL de tampón fosfato en 8 pocillos de la placa de microtitulación.

   

   Fuente: fotos tomadas por mi en el laboratorio de analisis clinico del IES albaida

4. A continuación, ponemos 50µL de la dilución madre en el primer pocillo, mezclamos bien con el tampón que habíamos añadido antes, y hacemos una dilución seriada al 50%, transfiriendo 50µL del primer pocillo al segundo, del segundo al tercero, y así sucesivamente hasta el sexto.

   

   Fuente: fotos tomadas por mi en el laboratorio de analisis clinico del IES albaida

5. Ahora, añadimos 50µL de solución madre en el séptimo pocillo, mezclamos bien con el tampón que habíamos añadido antes y descartamos 50µL (es el suero control).
6. Agitamos cuidadosamente la suspensión de hematíes y depositamos:
   1. 1 gota de R1 en los 6 primeros pocillos
   2. 1 gota de R2 en el 7º pocillo (control negativo)
   3. 1 gota de R1 en el 8º pocillo (control positivo)
7. Homogeneizamos bien todos los pocillos.

   

   Fuente: fotos tomadas por mi en el laboratorio de analisis clinico del IES albaida

8. Leer la reacción a las 2 horas.

 

RESULTADOS

En los resultados, podemos observar dos cosas:

• Botón: es una precipitación, e indica un resultado negativo.
• Velo: es una aglutinación, e indica un resultado positivo.

En nuestro caso, precipitaron todos, excepto el 8º pocillo, que salio un velo.

Fuente: fotos tomadas por mi en el laboratorio de analisis clinico del IES albaida

INTERPRETACIÓN

En nuestro caso, fue negativo en todas las muestras, puesto que precipitó en todos los pocillos. y podemos decir que salió bien, porque en el control positivo si apareció un velo y, por tanto, es positivo.

 

PRECAUCIONES

• Etiquetar correctamente todo lo utilizado durante la practica.
• No contaminar muestras y reactivos.
• Leer bien las indicaciones de los reactivos y productos utilizados.
• Desechar correctamente los residuos.
• Atemperar los reactivos y las muestras utilizados.
• no equivocarse de pocillos al echar los reactivos y las muestras, en caso de duda, volver a repetir.

 

INFOGRAFÍA Y WEBGRAFÍA

IMÁGENES: las imágenes aportadas a en este PNT para su realización son realizadas por mi en el laboratorio del instituto I.E.S. Albaida.

INFORMACIÓN:

• Protocolo obtenido del profesorado del instituto I.E.S. Albaida
• Wikipedia: https://es.wikipedia.org/wiki/Wikipedia:Portada
• Blog de laboratorio clínico: http://laboratorioareaclinica.blogspot.com/search/label/Tinciones%20bacteriol%C3%B3gicas