Determinación de colesterol total

OBJETIVO

Determinación cuantitativa de colesterol en sangre.

 

FUNDAMENTO

Se basa en un método enzimático colorimétrico. El colesterol presente en la muestra en contacto con los reactivos reacciona formando un compuesto coloreado, el cual, podemos medir por espectrofotometría. la concentración de colesterol es directamente proporcional a la intensidad del color formado.

 

MATERIALES

• Cubetas de espectrofotometría
• Espectofotómetro
• Gradilla para cubetas
• Papel de filtro
• Micropipeta
• Puntas de micropipeta
• Vaso de precipitado
• Muestra: suero
• Reactivos:
  • R1: tampon
  • R2: enzimas
  • Patrón: cholesterol cal (200mg/dL)

 

PROCEDIMIENTO

1. Encendemos el espectrofotómetro para que se equilibre el equipo.
2. Preparamos el Reactivo de Trabajo (RT) disolviendo el contenido de R2 en el bote de R1.
3. Preparamos tres cubetas con los siguientes contenidos:
   • Blanco: 1mL de RT
   • Patrón: 1mL de RT + 10µL de patrón
   • Muestra: 1mL de RT + 10 µL de muestra
4. Dejamos incubar durante 10 minutos a temperatura ambiente asegurándonos que quede bien homogeneizada la disolución.
5. Ajustamos el espectrofotómetro a 505 nm.
6. Ajustamos blanco con la cubeta que solo contiene RT.
7. Medimos el patrón y anotamos la absorbancia obtenida.
8. Medimos la muestra y anotamos la absorbancia obtenida.
9. Apagamos el espectrofotómetro.
10. Calculamos el colesterol total sustituyendo los datos obtenidos en la siguiente formula:

RESULTADOS

Los valores normales de colesterol son:

• Normales <200 mg/dL
• Moderados entre 200 y 239 mg/dL
• Alto >240 mg/dL

En nuestro caso, los valores obtenidos son:

• Blanco: 0
• Patrón: 0,425
• Muestra: 0,355
• Colesterol total: (0.355/0.425) x 200= 167,05

 

INTERPRETACIÓN

En nuestro caso, el resultado esta por debajo de 200mg/dL, por lo que los valores se encuentran dentro de lo normal y no hay ningún riesgo aparente.