Oxidasa

OBJETIVO

Determinar la presencia o no de la enzima oxidasa en un cultivo de un determinado microorganismo para su identificación.

 

FUNDAMENTO

Esta técnica se basa en poner en contacto un microorganismo con un sustrato que cambia de color cuando se oxida. Si el microorganismo posee la enzima oxidasa, oxidará el sustrato y se podrá detectar mediante un cambio de coloración.

Es muy util en la identifcación de bacterias gramnegtivas. Se usa para distinguir entre enterobacterias y pseudomonas.

 

MATERIALES

• Papel de filtro
• Mechero bunsen
• Mechero
• Placa petri vacía
• Vaso de precipitado (residuos)
• Asa de platino
• Reactivo: P-fenil diamina (oxidase reagent)
• Muestra: cultivo bacteriano en placa petri

 

PROCEDIMIENTO

1. Preparar todo el material necesario debidamente ordenado y rotulado sobre un papel de filtro en la mesa de trabajo
2. Encender el mechero bunsen con la ayuda de un mechero para crear un area de esterilidad alrededor de este donde poder trabajar sin riesgo de contaminar la muestra
3. Cortar un trozo de papel de filtro y colocarlo sobre sobre la placa petri vacía
4. Verter un par de gotas de reactivo sobre el papel de filtro cortado en el paso anterior
5. Coger con el asa de platino esterilizada previamente una muestra de cultivo y colocarla sobre el papel de filtro con reactivo
6. Esperar entre 15-30 segundos a ver si se produce un cambio de coloración

 

RESULTADOS

Los posibles resultados son:

• Positivo: Hay un cambio de coloración antes de 30 segundos (Pseudomonas)
• Negativo: No hay cambio de coloración antes de 30 segundos (enterobacterias)

En nuestro caso, solo se la hicimos al paciente 5, porque era la gramnegativa, y el resultado fue negativo, por lo que era algun tipo de enterobacteria.

 

PRECACIONES

• Todo debe estar perfectamente etiquetado y rotulado para evitar posibles errores a la hora del diagnostico
• No usar el mismo asa de siembra con distintas muestras, ya que eso provocaría una contaminación cruzada
• No se debe tener en cuenta cambios de coloración despues de 30 segundos, puesto que en presencia de aire el reactivo se puede oxidar, dando lugar a cambios de coloración y por tanto falsos positivos
• Se puede usar un solo trozo de papel con reactivo para varias muestras, pero teniendo en cuenta que no se toquen para evitar errores y contaminación