Electroforésis

 

OBJETIVO

Determinación de los componentes de una muestra y sus pesos moleculares en función de la migración en el gel de agarosa.

 

FUNDAMENTO

Esta técnica se basa en la facultad de las proteínas para migrar al exponerlas a una corriente eléctrica debido a la diferencia de carga entre la corriente eléctrica suministrada y la que poseen las proteínas de manera natural.

Ademas, en funcion del temaño molecular, migran con mayor o menor facilidad por el gel de agarosa según el tipo de proteinas, por lo que nos permite identificarlas e incluso cuantificarlas por la intensidad y tamaño de la linea resultante tras la realización de la técnica.

 

MATERIALES

• Papel de filtro
• vaso de precipitado (residuos)
• Gel de agarosa al 2%
• Cubeta de electroforesis
• Fuente de alimentación
• Sistema de captación de geles
• Micropipetas
• puntas de micropipeta
• Peine para hacer pocillos en gel de agarosa
• muestra: mezcla de proteínas
• controles: mezcla de proteínas conocidas
• Tampón de carga

 

PROCEDIMIENTO

1. Preparar el gel de agarosa calentadola en el microondas (para que se quede liquida)
2. Colocar en un molde con un peine para hacer los pocillos y esperar que se solidifique
3. En una cubeta para electroforesis, colocar el gel de agarosa en su posición adecuada
4. Depositar la muestra y los controles en los pocillos (cada uno en un pocillo diferente)

   

   Fuente: fotos tomadas por mi en el laboratorio de analisis clinico del IES albaida

5. Cubrir con solución tampón el gel de agarosa

   

   Fuente: fotos tomadas por mi en el laboratorio de analisis clinico del IES albaida

6. Conectar la cubeta de electroforesis a una fuente de alimentación y activar la corriente eléctrica a 120-130 voltios durante 1 hora

   

   Fuente: fotos tomadas por mi en el laboratorio de análisis clínico del IES albaida

7. Quitar la fuente de alimentación
8. leer los resultados

 

RESULTADOS

El resultado es una migración de los distintos componentes de la sustancia (proteínas) a alturas diferentes del gel de agarosa, con la aparición de lineas que muestran hasta donde han migrado las proteínas.

Fuente: M. de la Casa

INTERPRETACIÓN

Dependiendo de donde aparezca una linea o no, indicará el tipo de proteína que es, puesto que la distancia que recorre un tipo de proteína en concreto, en un tiempo determinado, es característico por que siempre tiene la misma velocidad de migración en las mismas condiciones.

Ademas de identificar que tipo de proteína es cada linea, y por tanto, los componentes de la muestra a analizar, también podemos determinar la cantidad, en función de la intensidad y grosor de la linea aparecida tras la migración.

 

PRECAUCIONES

• Debemos tener cuidado de donde ponemos las proteínas, puesto que migraran en función de su polaridad, y si nos equivocamos, podrían migrar hacia el lado que no queremos y salirse del gel, sin llegar a tener unos resultados óptimos.
• A la hora de pipetear, asegurarnos meter la muestra en los pocillos para una correcta migración.
• Asegurarnos de que pase el tiempo suficiente y necesario para que la muestra migre y podamos interpretar los resultados minimizando el error.
• Saber en todo momento que muestra hemos puesto en cada pocillo, para evitar fallos en los resultados para cada muestra.

 

BIBLIOGRAFÍA Y WEBGRAFÍA

IMÁGENES: las imágenes aportadas a en este PNT para su realización son realizadas por mi en el laboratorio del instituto I.E.S. Albaida.

INFORMACIÓN:

• Protocolo obtenido del profesorado del instituto I.E.S. Albaida
• Wikipedia: https://es.wikipedia.org/wiki/Wikipedia:Portada
• Blog de laboratorio clínico: http://laboratorioareaclinica.blogspot.com/search/label/Tinciones%20bacteriol%C3%B3gicas