Recuento de UFC en orina

OBJETIVO

Hacer un recuento de unidades formadoras de colónias (UFC) de una muestra de orina en medio de cultivo agar Kled.

 

FUNDAMENTO

Para la realización de esta técnica se hace con una cantidad muy pequeña de la muestra con el fin de que cuando crezca el cultivo, esten las colonias lo suficientemente separadas como para poder contarlas. Una vez crezca, se hace el recuento y se multiplica por el factor correspondiente en funcion de la cantidad sembrada para obtener el valor real de UFC en toda la muestra por ml.

Para esta técnica, se realiza un tipo de siembra en concreto (que explicare a continuación) sobre un medio de cultivo Kled, que es un medio ideal para orina.

 

MATERIALES

• Papel de filtro
• Mechero bunsen
• Mechero
• Vaso de precipitado (residuos)
• Rotulado permanente (para rotular)
• Asa de siembra desechable calibrada a 1µL y 10µL
• Muestra: orina
• Medio de cultivo: agar Kled

 

PROCEDIMIENTO

1. Preparar todo el material necesario debidamente ordenado y rotulado sobre un papel de filtro en la mesa de trabajo
2. Encender el mechero bunsen con la ayuda de un mechero para crear un area de esterilidad alrededor de este donde poder trabajar sin riesgo de contaminar la muestra
3. Rotular adecuadamente la placa petri con agar Kled con el dia de siembra, el paciente, el técnico que la realiza y para que es
4. Coger un asa de siembra de 1µL, introducirla en la muestra (meneando un poco con el asa para asegurarnos de coger una muestra representativa) y sacar con cuidado asegurandonos de haber cogido lo correcto con el asa de siembra graduada (es decir, que el agujerito este lleno)
5. Hacer una linea desde un extremo de la placa hasta el centro de forma totalmente recta descargando el asa de siembra
6. Desde el extremo donde comenzamos la linea en el paso anterior, hacemos un zig-zag hasta el centro cubriendo media placa para realizar la segunda extensión
7. le damos vuelta a la placa, y hacemos lo mismo que en el paso anterior pero desde el lado opuesto a donde hicimos la extension anterior para ocupar la placa por completo, descargar el asa de siembra en su totalidad, y tener toda la superficie cubierta para poder hacer finalemente el recuento
8. Esperar 24 horas a que se incube a 37ºC en la estufa para que haya crecimiento
9. Hacer un recuento (si se necesita, se puede usar una lupa con luz para facilitar el trabajo) y multiplicar el resultado por 1000, puesto que habiamos sembrado 1µL y necesitamos el resultado en UFC/mL.

RESULTADOS

En el paciente 2, el resultado fue de 174000 UFC/mL, un resultado dentro de lo normal y que pudimos contar perfectamente.

En el paciente 5, el resultado fue no concluyente, puesto que había demasiadas bacterias y era imposible hacer el recuento. Esto suponemos que se debe a que usamos el asa calibrada de 10 µL y no la de 1µL, por eso nos salieron muchas bacterias y no se podían diferenciar colonias y por tanto hacer el recuento.

 

PRECACIONES

• Hay que tener cuidado de que no se contamine la muestra a la hora de la extensión, por que hay que trabajar siempre en condiciones de esterilidad
• Todo debe estar perfectamente etiquetado y rotulado para evitar posibles errores a la hora del diagnostico
• Hay que procurar no usar demasiada muestra y realizar una buena extensión para poder después de la incubación y el crecimiento de los microorganismos, hacer un buen recuento con las colonias claramente diferenciadas.
• No usar el mismo asa de siembra con distintas muestras, ya que eso provocaría una contaminación cruzada