OBJETIVO
Identificación del tipo de enterobacterias mediante una batería de pruebas.
FUNDAMENTO
Esta técnica se basa en cuatro pruebas, las cuales, en función de sus resultados, te encamina hacia un tipo de enterobactérias u otro en la identificación de un cultivo bacteriano problema procedente de una muestra de un paciente.
Se suele utilizar en cultivos gramnegativos que han dado oxidasa negativo, puesto que son enterobactérias seguramente según estos resultados.
MATERIALES
- Papel de filtro
- Mechero bunsen
- Mechero
- Tubos de ensayo de 10 ml
- Asa de siembra de platino
- Pipeta pasteur
- Vaso de precipitado (residuos)
- Muestra: cultivo bacteriano
- Medios de cultivo: agua de peptona, MRVP, Simmons
- Reactivo de Kovacs
- Rojo de metilo diluido
-
Reactivo de α-naftol
- Reactivo KOH al 40%
PROCEDIMIENTO
- Preparar todo el material necesario debidamente ordenado y rotulado sobre un papel de filtro en la mesa de trabajo
- Encender el mechero bunsen con la ayuda de un mechero para crear un area de esterilidad alrededor de este donde poder trabajar sin riesgo de contaminar la muestra
INDOL
- Hacer un cultivo en cultivo en agua de peptona del microorganismo problema a identificar
- Incubar durante 24-48 horas en una estufa a 37ºC
- Añadir 5 gotas de reactivo de kovacs
- Esperar a ver si se produce la reacción unos segundos
ROJO DE METILO
- Hacer un cultivo en cultivo en MRVP del microorganismo problema a identificar
- Incubar durante 24-48 horas en una estufa a 37ºC
- Mezclar en un tubo de ensayo cultivo del microorganismo en MRVP con la misma cantidad de rojo de metilo (3 ml de cada uno)
- Agitar y ver la coloración resultante
VOGES PROSKAUER
- Hacer un cultivo en cultivo en MRVP del microorganismo problema a identificar
- Incubar durante 24-48 horas en una estufa a 37ºC
-
Añadir 0,5 ml de α-naftol y 0,5 ml de KOH al 40%
-
Agitar y poner en posición horizontal para que la superficie de contacto con el oxígeno aumente
-
Esperar 15 minutos
-
Poner el tubo en posición vertical y comprobar el resultado.
CITRATO DE SIMMONS
- Hacer un cultivo en cultivo en citrato de simmons del microorganismo problema a identificar
- Incubar durante 24-48 horas en una estufa a 37ºC
- Observar los resultados
RESULTADOS
INDOL
Los posibles resultados son:
- Positivo: Anillo rosa en la superficie del medio de cultivo (alrededor de la pared)
- Negativo: No aparece ningun anillo rosa en la superfice del cultivo
En nuestro caso, el resultado fue positivo, por lo que posee la enzima triptofanasa
ROJO DE METILO
Los posibles resultados son:
- Positivo: color rojo
- Negativo: color anaranjado amarillento
En nuestro caso, el resultado fue positivo, porque nos salio rojo, por lo que el microorganismo problema metaboliza los hidratos de carbono por la vía ácido-mixta.
VOGES PROSKAUER
Los posibles resultados son:
- Positivo: coloración roja
- Negativo: coloración si ncambio de color (amarilla transparente)
En nuestro caso, el resultado fue negativo, por lo que el microorganismo no utiliza la glucosa por la vía butilén-glicólica.
CITRATO DE SIMMONS
Los posibles resultados son:
- Positivo: Cambio de color a azul
- Negativo: Continua verde el medio
En nuestro caso, el resultado fue negativo, continuo verde, por lo que el microorganismo no usa el carbono del citrato como fuente de carbono
VIDEO GENERAL DE LA TECNICA
PRECACIONES
- Todo debe estar adecuadamente etiquetado para evitar errores a la hora de interpretar los resultados para cada paciente
- Hay que tener cuidado de no tocar distintas muestras con las mismas asas de platino sin esterilizarlas previamente para evitar contaminaciones cruzadas
- Todos los reactivos deben estar dentro de fecha para asegurar la precisión de los resultados
- Todo debe estar trabajado en condiciones de esterilidad para evitar contaminaciones y equivocaciones a la hora de dar los resultados
- Algunas pruebas se pueden hacer directamente en los medios de cultivo si después no va a ser necesario para nada mas ese cultivo y hay otros de reserva
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