OBJETIVO
Realizar una siembra de microorganismos en medio de cultivo solido.
FUNDAMENTO
Esta técnica se basa en coger una vez una cantidad representativa de muestra y extenderla por toda la placa petri en cuatro zonas de tal forma, que cada vez que pasamos de una zona a otra la cantidad de microorganismo se reduce mucho. De esta manera, conseguimos que en la ultima zona de extensión, solo haya bacterias aisladas, que formen colonias independientes y distinguidas unas de otras.
MATERIAL
- Papel de filtro
- Asa de siembra/asa de siembra estéril
- Mechero bunsen
- Mechero
- Estufa
- Rotulador permanente
- Muestra (cultivo bacteriano en agua de peptona en mi caso)
- Placa de petri con medio de cultivo solido
PROCEDIMIENTO
Esta técnica se puede realizar con un asa de siembra convencional, o con un asa de siembra estéril, que es de usar y tirar y de plástico. Explicare las dos modalidades.
ASA DE SIEMBRA CONVENCIONAL
- Encender el mechero bunsen con ayuda de un mechero para crear una zona de esterilidad alrededor de este.
- Abrir el tubo con el cultivo y flamear la boca para evitar que se contamine.
- Coger el asa de siembra y esterilizarla por flameado con el mechero bunsen.
- Coger con el asa de siembra una muestra representativa del cultivo, teniendo cuidado al introducir el asa de siembra de atemperarlo antes de introducirlo del todo en el cultivo.
- Flamear de nuevo la boca del tubo y cerrarlo.
- Desde una pared de la placa petri, hacemos un movimiento en zig-zag en un angulo de 45º, sin meternos mucho en el centro y ocupando aproximadamente un tercio de la superficie de los bordes.
- Flamear de nuevo el asa de siembra para esterilizarlo e ir agotando la carga bacteriana que hemos cogido del cultivo por toda la placa.
- Atemperar el asa de siembra pinchando un poco el medio de cultivo (en una zona sin muestra), posarla sobre la esquina donde habíamos acabado de hacer la extensión anteriormente, y desde ahí, se vuelve a hacer una extensión en zig-zag a 45 grados por el borde ocupando un tercio de la placa pero sin meternos en el centro.
- volver a repetir el paso 7. y 8. para ocupar el ultimo tercio del borde de la placa. siempre dejando el centro libre.
- Repetimos el paso 7. y posamos el asa de siembra en el final de la ultima extensión realizada y desde ahi, realizamos una ultima extensión en zig-zag por el centro de la placa.
- esterilizamos el asa de siembra y apagamos el mechero bunsen.
ASA DE SIEMBRA ESTÉRIL
- Rotulamos la placa petri por la parte inferior pegado al borde con la muestra que vamos a sembrar y la fecha de la siembra.
- Encender el mechero bunsen con ayuda de un mechero para crear una zona de esterilidad alrededor de este.
- Abrir el tubo con el cultivo y flamear la boca para evitar que se contamine.
- Coger con el asa de siembra estéril una muestra representativa del cultivo.
- Flamear de nuevo la boca del tubo y cerrarlo.
- Desde una pared de la placa petri, hacemos un movimiento en zig-zag en un angulo de 45º, sin meternos mucho en el centro y ocupando aproximadamente un tercio de la superficie de los bordes.
- Posar el asa de siembra sobre la esquina donde habíamos acabado de hacer la extensión anteriormente, y desde ahí, se vuelve a hacer una extensión en zig-zag a 45 grados por el borde ocupando un tercio de la placa pero sin meternos en el centro.
- Volver a repeir el paso 6. para ocupar el ultimo tercio del borde de la placa. siempre dejando el centro libre.
- Posamos el asa de siembra en el final de la ultima extensión realizada y desde ahí, realizamos una ultima extensión en zig-zag por el centro de la placa.
- Apagamos el mechero bunsen.
RESULTADOS
El resultado, es un cultivo por agotamiento de microorganismos, en el cual, en la primera extensión hay mucha densidad bacteriana, por lo que no es de mucha utilidad. En la segunda y tercera extensión, disminuye la densidad, pero sigue sin ser optimo para la identificación de colonias y por tanto, de bacterias. En la ultima extensión, la densidad ha disminuido lo suficiente como para ver colonias aisladas y poder identificar e incluso cogerlas y cultivarlas de forma aislada para hacer un cultivo puro.
INTERPRETACIÓN
Los cultivos han salido bien pero con poca carga bacteriana, presuntamente porque los cultivos en agua de peptona de donde cogimos la muestra para cultivar, están ya en una fase de muerte, puesto que los hicimos hace mucho tiempo y los nutrientes se acaban.
Aun así, han salido bastante bien, y hemos podido un crecimiento moderado pero suficiente de microorganismos en nuestros cultivos.
PRECAUCIONES
- No introducir el asa de siembra mas de la primera vez en una zona ya extendida, puesto que sino volveríamos a coger muestra y queremos que se agote.
- Tener cuidado al poner en contacto el asa de siembra esterilizada con la muestra, si esta muy caliente destruirá la muestra, por lo que hay que atemperarla.
- Usar siempre guantes para manipular las muestras.
- No encender el mechero bunsen con guantes.
- Asegurarnos de no tocar nada con el asa de siembra cuando contenga muestra, puesto que es un inoculo de bacterias. En caso de entrar en contacto con algo, desinfectar inmediatamente.
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