Técnica difusión radial (easy plate y elaboración propia)

OBJETIVO

Detectar y cuantificar anticuerpos del tipo IgG, IgM e IgA en una muestra.

 

FUNDAMENTO

Se basa en la capacidad de los antígenos y los anticuerpos de unirse de manera específica formando inmunocomplejos, siempre y cuando se encuentren en las concentraciones suficientes tanto antígenos como anticuerpos.

 

MATERIALES

• Agar-agar
• Placas de Petri
• Micropipeta
• Puntas de micropipeta
• Pipeta pasteur
• Erlenmeyer
• Microondas
• Plantilla para pocillos
• Muestra: suero
• Reactivo: antígenos

Fuente: google imagenes

PROCEDIMIENTO

Primero, tenemos que prepara las placas de Petri con el agar y los pocillos, para ello, primero vamos a preparar el agar con antígeno:

1. Con la ayuda de una balanza pesamos el agar según la cantidad que vayamos a preparar mirando las indicaciones que vienen en el envase.
2. Se mida la cantidad de agua necesaria con una probeta.
3. Se mezcla el agua destilada y el agar con una varilla agitadora en un vaso de precipitado.
4. Se le añade la concentración deseada de antígeno complementario al anticuerpos que deseamos buscar en la muestra problema.
5. Se pone la disolución a calentar en el microondas sin que llegue a hervir; retirar justo antes de que subo y se desborde del recipiente.
6. Verter el preparado en las placas Petri (cubrir toda la superficie); y dejar enfriar a temperatura ambiente.

Una vez están solidificado el agar, con la ayuda de una pipeta Pasteur y una plantilla, hacemos los pocillos donde depositaremos las muestras:

1. Colocamos la plantilla sobre una superficie plana y colocamos una placa Petri encima con el dibujo bien centrado.
   

   
2. Apretamos un poco la pipeta, hacemos el pocillo con la punta como si fuera un punzón, soltamos la pipeta para succionar el fragmento de agar que deseamos retirar.

   

   Fuente: fotos tomadas por mi en el laboratorio de analisis clinico del IES albaida

3. Realizamos esto para hacer todos los pocillos en todas las placas de Petri.

Otra opción mucho mas fácil y rápida, son los easy plate, es decir, soportes para la difusión radial ya preparados y listos para uso:

Fuente: fotos tomadas por mi en el laboratorio de analisis clinico del IES albaida

Tanto si preparamos las placas de Petri, como si usamos los easy plate, el procedimiento es el mismo:

1. Cogemos la placa Petri o el easy plate con el antígeno especifico al anticuerpo que deseamos buscar en la muestra problema.
2. echamos una gota de suero problema en los pocillos, sin que llegue a rebosar.
3. esperamos 24 horas a que se produzca la difusión radial (en forma circular) o no.

 

RESULTADOS

Los posibles resultados son dos:

• No hay difusión radial: No se vería ningún círculo alrededor del pocillo.
• Hay difusión radial: se vería un circulo al rededor del pocillo.

Fuente: fotos tomadas por mi en el laboratorio de analisis clinico del IES albaida

INTERPRETACIÓN

La ausencia de un circulo al rededor del pocillo con muestra, indicaría un negativo, y por tanto, la ausencia de anticuerpos en la muestra de suero.

La presencia de un circulo al rededor del pocillo con muestra, indicaría un positivo, y por tanto, la presencia de anticuerpos en la muestra de suero.

Una vez determina la presencia de anticuerpos en una muestra de suero, podemos cuantificarlo midiendo el diámetro del circulo formado en la prueba, para ello tenemos dos opciones:

• Usar una regla especifica: medimos la longitud de la circunferencia y con ella podemos calcular el diámetro del circulo obtenido en la practica.

Fuente: google imagenes

• Usar una regla normal: medimos el diámetro del circulo directamente.

 

PRECAUCIONES

• Etiquetar correctamente todo lo utilizado durante la practica.
• No contaminar muestras y reactivos.
• Leer bien las indicaciones de los reactivos y productos utilizados.
• Desechar correctamente los residuos.
• Atemperar los reactivos y las muestras utilizados.
• Asegurarnos de que no sobresalga la gota de muestra o reactivo de los pocillos, puesto que podría interferir en los resultados.
• Llenar las placas de petri con la cantidad correcta de agar.
• Usar guantes térmicos para evitar quemarnos en la elaboración del agar.

 

INFOGRAFÍA Y WEBGRAFÍA

IMÁGENES: las imágenes aportadas a en este PNT para su realización son realizadas por mi en el laboratorio del instituto I.E.S. Albaida y de google imagenes.

INFORMACIÓN:

• Protocolo obtenido del profesorado del instituto I.E.S. Albaida
• Wikipedia: https://es.wikipedia.org/wiki/Wikipedia:Portada
• Blog de laboratorio clínico: http://laboratorioareaclinica.blogspot.com/search/label/Tinciones%20bacteriol%C3%B3gicas