Espectrofotómetro

¿Qué es el Espectrofotómetro?

Es un instrumento de análisis que permite cuantificar la radiación absorbida o transmitida, a determinada longitud de onda (λ), por una solución que contiene una cantidad desconocida de soluto, y una que contiene una cantidad conocida de la misma sustancia.

De esta manera nosotros  podemos cuantificar la cantidad de un analito determinado en una disolución mediante un calculo matemático con los valores medidos con el equipo aplicados en la siguiente formula:

Para ello, una fuente de energía emite una luz blanca (compuesta por todas las longitudes de onda, y por tanto, por todos los colores) que pasa primero por un monocromador que selecciona una longitud de onda específica que nos interesa. Esa longitud de onda, la seleccionamos en función del analito que pretendemos cuantificar; es decir, dependiendo de que longitud de onda es la mas absorbida por ese analito (esto lo sabemos gracias a los espectros realizados en los estudios específicos de cada analito previamente por los laboratorios, como puede ser la glucosa o el colesterol entre otros).

Una vez que ha pasado la luz por el monocromador y se ha seleccionado una única longitud de onda, esta atraviesa la cubeta con la muestra, y parte de esta radiación se queda en la muestra (absorbida por el analito que queríamos cuantificar y por el cual habíamos seleccionado la longitud de onda específicamente), a esto se le llama absorbancia (A). La radiación que no es absorbida por la muestra y la atraviesa, se llama transmitancia (T), y es medida por un detector de energía radiante.

Para finalizar, el equipo nos da la absorbancia (el valor que realmente nos interesa y nos resulta de utilidad) en la pantalla, pero realizando previamente y de manera instantánea un calculo automático con la transmitancia, que es lo que realmente detecta el aparto.

 

¿Para que sirve?

• Determinaciones en los análisis clínicos en sangre (glucosa, calcio, albumina, fósforo…).
• Determinaciones en los análisis de aguas residuales y potables (determinaciones de fenoles en agua, cianuro en agua…).
• Determinaciones en el área microbiológica y bioquímica (control de cinética enzimática, determinación de fósforo en ADN…).
• Determinaciones en el área de análisis de alimentos (determinación de nitrógeno proteico)

 

¿Que partes lo componen?

Fuente estable de energía radiante

• Lámpara de wolframio o de tungsteno (la más utilizada para las medidas en la región visible).
• Lámparas halógenas.
• Lámparas de descarga de hidrógeno o deuterio.
• Fuentes de luz láser (haces de luz de una sola longitud de onda y totalmente paralelos).

Rejillas de entrada y salida

Intentan conseguir un haz de rayos luminosos paralelos,
No son necesarias si la fuente de luz es láser.

Monocromador

Puede ser de dos tipos:

Prisma

Capaces de descomponer la luz en sus distintas longitudes de onda. Pueden ser de cuarzo, vidrio, etc.

Redes de difracción

Formadas por una placa metálica en la que se graban un gran número de surcos equidistantes (1.000 a 2.000 por mm) de tal forma que cada surco actúa como un pequeño prisma.

Detector de energía radiante

Convierte la energía luminosa en energía eléctrica (corriente de electrones) gracias a:

• células fotovoltaicas o de barrera.
• tubos multiplicadores.

Medidor-presentador de datos

Sistemas digitales que presentan en un display los valores de absorbancia o transmitancia, según le indiquemos nosotros al aparato.